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芯片實驗室技術應用之POCT核酸檢測

芯片實驗室技術為基礎的POCT檢測在癌癥、愛滋病、心臟病等早期診斷中具有優勢。重點研究工作包括核酸檢測、免疫檢測和細胞檢測。

POCT檢測中,核酸檢測起著不可替代的作用,它可以直觀地反映疾病的發展狀況和病毒感染的嚴重性。在生物醫學方面,最早對芯片實驗室的研究集中在核酸檢測。普通核酸檢測包括樣品預處理、核酸擴展(通常采用PCR技術)和對擴展產品進行檢測。將上述步驟整合為一小塊芯片進行核酸檢測,也是芯片實驗室研究的主要內容。但是到現在為止

以核酸檢測為基礎的微全分析芯片,有很大的困難。這主要是由于傳統核酸檢測技術結合核酸檢測的實時熒光PCR技術造成的,在高通量、重復性、成本、檢測靈敏度、穩定性等方面具有很大的優勢。因此,基于微流體的核酸檢測技術難以找到自身優勢,其發展方向只能集成在一塊微型芯片上,集成多種功能,且價格低廉,操作簡單,即向POCT方向發展。然而,與其它檢測方法不同的是,由于原檢測方法小型化或小型化,核酸檢測需要多種試劑,反演的過程也不一樣,因此需要閥門設計,從而增加了設計難度;對傳統光學檢測方法,也限制了它的進一步發展。在檢測微全分析芯片POCT時,需要考慮可靠性和成本。

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Easley等人將PDMS制造的閥門集成到玻璃晶片中,在芯片上完成固相核酸的提取、PCR的擴增以及Pal等采用類似方法制作的芯片檢測流感病毒。有研究者SU-8制作的光波導器件集成到微流體芯片中。

薄片PCR擴增及實時熒光檢測。以上研究均取得了較好效果。利用實時熒光技術,采用了恒溫擴增技術(NASBA),利用COC制造的10通道芯片對16型人乳頭瘤病毒進行檢測,檢測系統以小LED為光源,PMT(光電倍增管)為信號。

除了傳統的熒光檢測和電泳檢測方法外,許多研究者也在探索POCT的檢測方法。人使用場效應管檢測擴展的PCR產品,無需對PCR產品進行標記;不需要將擴展的DNA樣品凈化,直接滴入可丟棄的印刷電化學芯片中,DNA與作為電化學探針的氧化還原分子結合,導致探針分子的電流明顯降低,從而間接檢測到與DNA結合的數量。該法快速、簡便、成本低。以SNP為基礎,成功地檢測了單核苷酸多態性,認為SNP是一種良好的基因標記,通過檢測個體的SNPs,可以預測疾病,準確診斷疾病,預測個體對治療藥物的反應,有助于制定更有效、更安全的個性化治療策略。這兩種信號都是直接輸出信號,易于ICT信號處理電路集成,是POCT的發展方向。

微流控芯片技術與傳統的免疫層析試紙技術相結合,是POCT核酸檢測的又一發展趨勢。

微芯片,以水凝膠作為閥門,在檢測方法上,引入新材料-采用前向光材料及地高辛進行檢測。UCP具有獨特的向上發光特性。

這是通過儀器準確檢測到的可見光信號顯示出微免疫反應。這類可見光與集成的光學電子元件結合后,可由物理傳感器接收,然后轉換為電壓值或電流值,并與被測物體的具體濃度一一對應,實現定量檢測。UPT不同于傳統的熒光檢測,它采用低能量的紅外線作為激發光,從而完全避免了因樣品的腐蝕和自身衰變而產生的發光淬火。運用同樣的技術(圖1),結合樣品預處理、PCR和免疫層析法,成功地檢測了口液中的致病菌。此法成本低,結果易讀,可半定量或定量檢測。



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