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用于核酸擴增的微流控PCR熱循環儀

聚合酶鏈式反應(PCR)在核酸擴增檢測中至關重要,廣泛應用于傳染病檢測、腫瘤篩查和食品安全檢測等許多應用;然而,大多數PCR設備的加熱和冷卻速率效率低下,這大大限制了它們在醫院急診、機場和海關等特殊情況下的應用。科研人員提出了一種溫度控制策略即微流控PCR熱循環儀,通過在多個溫度區之間切換微流控芯片并過度增加溫度區和溶液之間的溫差,顯著提高溶液溫度的斜坡率。結果表明,溶液溫度的上升速率在一定范圍內是溫差的線性函數,溫差越大,上升速率越快。核酸檢測(NAT)因其高靈敏度和良好的特異性而成為病原微生物檢測的金標準;它被用于許多應用,如傳染病檢測、腫瘤篩查、法醫鑒定、基因組計劃、食品安全檢測和環境監測。例如,識別新冠肺炎感染的主要標準是NAT的結果。核酸擴增(NAA)是NAT中的一個重要步驟,能夠在一段時間內大規模擴增核酸分子。聚合酶鏈式反應(PCR)是臨床實踐中最常用的NAA技術,通常包括預變性、變性、退火和延伸階段;PCR儀器(也稱為熱循環儀)為這一過程提供了適當的溫度條件。許多研究人員對快速熱循環儀進行了更深入的研究,能夠用低熱容量反應器和微流體實現更快溫度變化的小型化PCR儀器越來越受歡迎。

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目前熱循環儀的實施可分為三種主要類型:熱對流、固定微室和流道類型。熱對流型用于NAA,通過在反應器中的不同區域之間誘導溶液熱對流,這可以允許更快的溫度變化,但溶液不能保持穩定和長期的恒溫,因此擴增效率值得懷疑。固定微室型是將溶液固定在一個微小的腔室中,并由加熱器加熱和冷卻。固定式微室型的檢測靈敏度可以得到有效保證,但傳統的基于珀爾帖的加熱方法無法實現快速PCR,因為溫度變化需要很長時間并且在臨床應用中可能具有有限的潛力。

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因此,深入分析影響升溫速率的因素,開發具有臨床應用潛力的超快熱循環儀具有重要價值。本研究提出了一種溫度控制策略,通過在多個溫度區之間切換反應器并過度增加溫度區和溶液之間的溫差,顯著提高溶液的升溫速率;因此,科研人員設計了一種超快熱循環儀,其中包含溶液的微流控芯片在三個具有特殊設置的恒溫區之間循環,結合了固定微室和流道類型熱循環儀的優點,為PCR提供了超快、準確和穩定的溫度條件。首先,我們基于傳熱理論對影響溶液升溫速率的關鍵因素進行了建模和分析,并基于相關計算數據設計和構建了一個測試平臺;其次,科研人員使用溫度超調策略探索了斜坡率的變化;最后,科研人員對熱循環儀進行了熱循環性能測試,并對真實生物樣本(人巨細胞病毒,HCMV)進行了PCR檢測。

在這項研究中,科研人員提出了一種溫度控制策略,通過在多個溫度區之間切換微流控芯片并過度增加溫度區和溶液之間的溫差,顯著提高溶液的升溫速率;因此,科研人員設計了一種超快熱循環儀。實驗結果表明,溶液溫度的斜率在一定范圍內是溫差的線性函數,溫差越大,斜率越快。

免責聲明:文章來源https://doi.org/10.3390/mi14030658  傳播知識、有益學習和研究為宗旨。轉載僅供參考學習及傳遞有用信息,版權歸原作者所有,如侵犯權益,請聯系刪除。



標簽:   微流控芯片
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