近年來隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究技術(shù)的進(jìn)步和CTC臨床應(yīng)用價值凸顯，許多研究機構(gòu)和研發(fā)團隊都在推出不同的CTC檢測技術(shù)。由于血液中CTC的含量極低，目前主流的檢測方法是先捕獲（富集）后檢測，少量方法是不捕獲（富集）直接檢測。CTC檢測技術(shù)包括CTC的富集（分離）和CTC的分析鑒定（識別）。本篇文章將介紹CTC的富集和分析方法，尤其重點介紹CTC的富集方法。

 一CTC富集方法的分類和原理

人體循環(huán)系統(tǒng)中CTC的含量極低，腫瘤轉(zhuǎn)移患者每毫升全血中僅有1～10個CTC，因此要實現(xiàn)CTC的檢測對其進(jìn)行分選富集是一個關(guān)鍵的步驟。CTC分選富集效果的優(yōu)劣將會直接影響其后續(xù)的檢測效果，因此高純度、高靈敏性（不丟失CTC）、快速、高細(xì)胞活性的CTC分選富集是CTC臨床應(yīng)用的重點和難點。

CTC的富集方法可以分為生物化學(xué)特性富集法（親和性富集法）和物理特性富集法。親和性富集法主要是根據(jù)通過細(xì)胞表面特異性表達(dá)的蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物分離靶細(xì)胞，包括正向捕獲CTC的陽性富集法和負(fù)向去除白細(xì)胞的陰性富集法。物理特性富集法主要是根據(jù)CTC的大小、密度、力學(xué)和介電性能等物理特性將CTC篩選出來。

1.1 親和性富集法

親和性富集法根據(jù)結(jié)合的靶細(xì)胞是CTC還是白細(xì)胞，可分為陽性富集法和陰性富集法。陽性富集法主要利用特異性抗體與腫瘤細(xì)胞表面抗原進(jìn)行特異性結(jié)合來富集CTC。CTC分為上皮細(xì)胞表型、間質(zhì)細(xì)胞表型和上皮間質(zhì)細(xì)胞混合表型，因此用于CTC陽性富集的特異性抗體分為識別上皮標(biāo)志物、識別間質(zhì)標(biāo)志物和識別上皮間質(zhì)標(biāo)志物三種。其中，上皮標(biāo)志物在正常上皮細(xì)胞和上皮腫瘤（即癌）上表達(dá)，但在間質(zhì)白細(xì)胞上不存在，因此經(jīng)常用于區(qū)分癌細(xì)胞和正常血細(xì)胞。上皮細(xì)胞粘附分子（EpCMA）是最常用于上皮表型CTC陽性富集的細(xì)胞表面標(biāo)志物。此外，由于細(xì)胞骨架蛋白對于上皮細(xì)胞具有特異性，細(xì)胞角蛋白家族成員（即CK8，CK18和CK19）已經(jīng)成為檢測具有上皮表型癌癥患者CTC的“金標(biāo)準(zhǔn)”標(biāo)記物。陰性富集法也稱白細(xì)胞去除法，通常用識別CD45或CD14的特異性抗體與白細(xì)胞結(jié)合，從而去除全血中的白細(xì)胞。

除了特異性抗體，親和性結(jié)富集法的某些技術(shù)采用與CTC或白細(xì)胞表面抗原特異性結(jié)合的多肽或適配體（aptamer，一種單鏈DNA或RNA分子，與目的蛋白有很高的親和力和特異性）替代抗體來實現(xiàn)陽性或陰性富集。

生化特性富集法

1.1.1 免疫磁珠技術(shù)

親和性富集法目前基于免疫磁珠技術(shù)和微流控芯片技術(shù)對CTC進(jìn)行富集。免疫磁珠技術(shù)是根據(jù)免疫親和的原理，將免疫磁珠與捕獲抗體或特異性多肽（可與血液中的CTC或白細(xì)胞表面抗原相結(jié)合）相連接，隨后通過磁場即可將磁珠捕獲與未捕獲的細(xì)胞分離。

基于免疫磁珠技術(shù)的親和性富集法的原理

1.1.2 微流控芯片技術(shù)

微流控（microfluidics）是一種精確控制和操控微尺度流體，以在微納米尺度空間中對流體進(jìn)行操控為主要特征的科學(xué)技術(shù)。微流控芯片是微流控技術(shù)實現(xiàn)的主要平臺和技術(shù)裝置，因其樣品量小、流速可控及構(gòu)件透明性等特點，已被廣泛應(yīng)用于CTC的分選富集中。微流體芯片技術(shù)基于親和性富集法分離CTC時，芯片內(nèi)部的微通道或微結(jié)構(gòu)上修飾能夠與CTC或白細(xì)胞表面抗原結(jié)合的特異性抗體或適配體，當(dāng)血液流經(jīng)芯片時，特異性抗體或適配體可與目的細(xì)胞表面抗原結(jié)合，隨后將CTC或白細(xì)胞粘附在芯片上，實現(xiàn)CTC的陽性捕獲或陰性富集。

基于微流體芯片技術(shù)的親和性富集法的原理

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