安賽蜜中文名稱為乙酰磺胺酸鉀，為人工合成甜味劑， 經(jīng)常食用合成甜味劑超標(biāo)的食品會(huì)對人體的肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)造成危害， 特別是對老人、孕婦、小孩危害更為嚴(yán)重。如果短時(shí)間內(nèi)大量食用，會(huì)引起血小板減少導(dǎo)致急性大出血。因此需按業(yè)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格控制，本文推出了一種高效液相色譜測定食品中的安賽蜜的方法。

       1、原理

       試樣中安賽蜜經(jīng)高效液相反向C18柱分離后,以保留時(shí)間定性,外標(biāo)法定量。

       2、試劑

       除非另有說明, 所有試劑均為分析純, 水為GB/T6628 規(guī)定的一級(jí)水。

       (1) 0102mol 乙酸胺溶液:稱取1154g 乙酸銨加水溶解定容至1000ml ,經(jīng)濾膜(0145um) 過濾。

       (2) 甲醇:色譜純。

       (3) 10 %亞鐵氰化鉀溶液。

       (4) 20 %乙酸鋅溶液。

       (5) 安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,精稱安賽蜜0.1000g , (基準(zhǔn)試劑或者標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) ,用純水溶解。移入100ml 容量瓶中,加水定容至刻度,即含安賽蜜1mg/ ml 。

       (6) 安賽蜜使用液, 準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10ml 于100ml 容量品種。加水至刻度,即為0.1mg/ ml 。然后分別移取此液2ml 4ml 6ml 8ml 10ml 于50ml 容量瓶中即得含安賽蜜4ug/ ml 8ug/ ml 12ug/ ml16ug/ ml 20ug/ ml 的標(biāo)準(zhǔn)液系列。

       3、儀器

       (1) 高效液相色譜儀(帶紫外檢測器) 。

       (2) 分析天平: 010001g 和0101g。

       (3) 超聲清洗儀(溶劑脫氣用) 。

       (4) 離心機(jī)轉(zhuǎn)速不低于4000r/ min。

       (5) 蝸旋混勻器

       4、分析步驟

       (1) 汽水、可樂型飲料:將試樣溫?zé)?攪拌除去二氧化碳或超聲脫氣。吸取5ml 試液至50ml 容量瓶中,加水約20ml 蝸旋混勻調(diào)PH 至中性, 定容至刻度, 搖勻, 過0.45um 的濾膜,待HPLC 分析用。

       (2) 果汁果茶類:吸取5ml 試液至50ml 容量瓶中,加水約20ml 蝸旋混勻調(diào)PH 至中性,定容至刻度,離心10分鐘(4000r/ min) ,取上清液過0.45um 的濾膜,待HPLC分析用。

       (3) 植物蛋白飲料、乳飲料、醬油、果醬、冷飲:稱取(2～5) g 試樣于50ml 容量瓶中加入10 %亞鐵氰化鉀、20 %乙酸鋅溶液各(1～3) ml (視蛋白含量多少) ,調(diào)PH 值至中性,用水定容至刻度,搖勻,靜置沉淀后用中速定性濾紙過濾,濾液再用0.45um 濾膜過濾,待HPLC 分析用。

       (4) 面包、糕點(diǎn)、糖果、果凍、炒制堅(jiān)果等固體類:稱取粉碎試樣(2～5) g 于50ml 容量瓶中加入10 %亞鐵氰化鉀、20 %乙酸鋅溶液各(1～3) ml (視蛋白含量多少) ,調(diào)PH 值至中性,用水定容至刻度,搖勻,靜置沉淀后用中速定性濾紙過濾,濾液再用0.45um濾膜過濾待HPLC分析用。

       5、測定

       (1) 高效液相色譜參考條件

       色譜柱: YWG—C18 416mm ×150mm 粒徑5um

       流動(dòng)相:甲醇:乙酸銨溶液(0102mo1/ 1) (5 :95)

       流速:1m1/ min

       進(jìn)樣量:10ul

       檢測器:紫外檢測器,230nm

       (2) 標(biāo)準(zhǔn)曲線: 分別進(jìn)樣含安賽蜜、4ug/ ml 8ug/ ml 12ug/ ml 16ug/ ml 20ug/ ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液各10ul ,進(jìn)行HPLC 分析,然后以峰面積為縱坐標(biāo),以安賽蜜的含量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

       (3) 試樣測定: 吸取處理后的試樣溶液10ul 進(jìn)行HPLC 分析,測定其峰面積,從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得測定液中安賽蜜的含量。

       6、結(jié)果計(jì)算

       試樣中安賽蜜的含量按下式計(jì)算;

       X =C ×V ×1000/M ×1000

       式中:

       X —試樣中安賽蜜的含量,單位為毫克每千克或毫克每升(mg/ kg 或mg/ L) ;

       C —由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得進(jìn)樣液中安賽蜜的量,單位為微克每毫升(ug/ ml) ;

       V —試樣稀釋液總體積,單位為毫升(ml) ;

       M —試樣質(zhì)量,單位為克或毫升(g 或ml) 。

       7、加標(biāo)回收率

       空白果汁飲料樣品加標(biāo)回收率結(jié)果見表1 。加標(biāo)回收安賽蜜回收率在9318 % ～10118 % ,平均回收率為97.75 %。實(shí)驗(yàn)證明用此方法測定食品中的安賽蜜,操作簡便,分析結(jié)果準(zhǔn)確、工作效率高,此方法切實(shí)可行。

附：汶顥商城，高效液相色譜儀——http://www.sys17.cn/goods.php?id=405